Qu'est-ce que l'ATP?

L'Atp est l'Adénosine Triphosphate, molécule produite dans toutes les cellules vivantes servant à stocker ou à libérer l'énergie en vue de réaction intra ou extra-cellulaire.

Lorsque les cellules meurent et leurs membranes se dégradent l'ATP est libéré de la cellule

La production d'ATP intra-cellulaire s'il est détectée confirmerait que les cellules présentes dans l'échantillon encore vivantes.

Comment détecte t'on l'ATP?

Réaction de la Luciférine/Luciférase (Substrat-Enzyme) en présence de molécules d’ATP

Limites de l'Atpmétrie totale:

• Pas de distinction de l’ATP bactérien de l’ATP total
• L’ATP non bactérien dépasse largement les valeurs d’ATP bactérien:
  • ATp d'une seule cellule de peau, pollen, ou de microalgue > 1000 bactéries
• déclenche inutilement de faux positifs (fausses alertes)
• pas de corrélation avec les milieux de cultures sensibles

• Aucune évacuation des substances inhibitrices avant détection de l’ATP

• La réaction de bioluminescence est réduite voir détruite par les substances inhibitrices présentes

  • réduction du signal de bioluminescence > 90% (Velasquez, 199)

• Faux négatifs: l’échantillon laisse croire qu’il ya peu de bactéries

• Pourcentage d’inhibition imprévisible dans un échantillon environnemental:

  • nombre et concentration de substances inhibitrices inconnues d'un échantillon à un autre
• Faible volume prélevé par écouvillonnage (0.1ml prélevé pas représentatif de la population bactérienne dans un milieu liquide)

Pour que l'atpmétrie soit corrélée avec les milieux de cultures sensibles ou les méthodes rapides de détection des bactéries viables :

0. il faut une évacuation préalable des substances inhibitrices présentes dans l'échantillon
0. une extraction sélective de l'ATP non bactérien et son évacuation
0. un lessivage de l'Atp libre présent dans l'échantillon
0. une extraction sélective de l'ATP bactérien et sa détection par bioluminescence
0. être capable de réactiver les spores bactériennes avant leur détection

Pour répondre à ses besoins une solution brevetée mondialement existe:

PROFILE-1 le seul kit rapide pour la mesure quantitative de l’ATP bactérien:

• corrélé avec les milieux de cultures les plus sensibles et publié scientifiquement
• insensible à la présence de substances inhibitrices grâce à un système de lessivage breveté
• discriminant l'atp bactérien de l'atp non microbien
• détectant les spores bactériennes (grâce à un protocole ingénieux de réactivation).

Applications de la détection de l'Atp bactérien:

• Qualité microbiologique de l'air intérieur et extérieur

• Contrôle bactérien des surfaces en milieu ultra-propre ou agro-alimentaire

• Flore bactérienne des eaux de Tours aéro-réfrigérantes

• Flore bactérienne de l'eau potable

Etape 1: lyse des cellules non microbiennes (pollens, micro-algues) et libération de l'atp non microbien à l'intérieur de la Filtravette

Etape 2: évacucation  par pression positive de l'Atp non microbien avec les substances inhibitrices (chlore, sels, biocides...)et absorption sur buvard

Etape 3: introduction de la Filtravette dans le tiroir ouvert du Profile-1 et lyse des cellules bactériennes et libération de l'Atp bactérien dans la solution

Etape 4: ajout de la luciférine/luciférase et mélange avec l'Atp bactérien

Etape 5 (non illustré): fermeture du bioluminomètre Profile-1 et lecture de la bioluminescence exprimée en Unités Relatives de Lumière